原理
本试剂盒采用竞争一步 ELISA 方法。样品中的游离呕吐毒素与酶标记的呕吐毒素竞争结合酶标板微孔中固相化的呕吐毒素特异性抗体，通过洗涤洗掉未结合的酶标记呕吐毒素，再通过酶的专一性显色剂显色根据显色的深浅来判断样品中呕吐毒素。根据竞争性原理，如果样品中的游离呕吐毒素量少，则酶标记的呕吐毒素结合的多，显色深；反之，则显色浅。检测时设置标准线，通过标准曲线测定样品中呕吐毒素的含量。
3 试剂盒组成
3.1呕吐毒素酶标板：96孔
3.2 呕吐毒素标准品：6瓶（1ml/瓶），分别是：
3.3 呕吐毒素酶结合物：1瓶（6ml）
3.4 浓缩洗涤液：1瓶（10×，50ml）
3.5 底物液A：1瓶（6ml）
3.6 底物液B：1瓶（6ml）
3.7 终止液：1瓶（6ml）
3.8 说明书：1份
3.9 质检报告：1份
4 需要而未提供的材料
4.1 酶标仪（检测波长450nm，参考波长630nm）
4.2 微量移液器
4.3 前处理所需试剂及相关仪器
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于2-8℃，切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
5.3 该产品有效期为12个月
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（20-25℃）。
6.3 不要使用过期试剂盒；不同批号试剂盒中的试剂不得混
用；不同标准品、样品所用吸头不能混用。
6.4 避免所有试剂接触皮肤；混合试剂时应避免起泡。
6.5使用过的玻璃容器及呕吐毒素溶液接触过的容器最好用 pH7 的高氯酸溶液（10%V/V）浸泡过夜。
7 试剂配制
7.1 洗涤工作液：
用去离子水将浓缩洗涤液按1：9体积进行稀释
例如：10ml洗涤工作液=1ml浓缩洗涤液+9ml去离子水
8 样品处理程序
8.1 取 2g 有代表性的研磨粉末状样品，置于干净离心管或广口 瓶中，加入 10ml 去离子水，仪器振荡或手动混匀 5 分钟；
8.2 离心机 5000r/min离心 10 min，取上清液用去离子水按 1:3 稀释； 例如：取 200μl 上清液加 600μl 去离子水，待检。
8.3 用 HCl 或 NaOH 将 8.2 中待检上清稀释液调 PH 至中性（若样本还是浑浊，建议用8000r/min离心5min），按 50μl/孔进行加样分析检测。
注意：样品稀释系数为 20；如果检测值超出检测范围，请用去离子水将 8.3 中待检上清稀释液进一步稀释到合适的浓度，并调整样品稀释系数。
9 酶免分析步骤
9.1实验准备
9.1.1预先进行编号，标记标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测（每次实验都须做标准曲线）；
9.1.2使用前将所有试剂回升至室温,取所需数量的微孔条，将多余板条用试剂盒提供的自封袋重新密封同时排除里面空气，并立即放回2-8℃干燥保存。
9.2分析步骤
9.2.1在标准品孔中加入50?l各标准品溶液，在各样品孔中加入50?l样品溶液；
9.2.2在所有孔中加入50?l的呕吐毒素酶标记物溶液，轻微晃动反应板使之彻底混匀，室温下（20-25℃）温浴40min；
9.2.3甩干孔中液体，用洗涤工作液（250ul/孔）洗涤微孔板4-5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体；
9.2.4洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50?l底物液A，再加 50?l底物液B，轻微晃动使之混匀；
9.2.5室温下（20-25℃）温浴15min（若颜色较浅可适当延长至20min），每孔中加入50?l终止液，混匀，在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。
10 结果计算
推荐使用快灵Log/Logit计算程序对检测结果进行计算，将检测OD均值和标准品浓度输入，即可自动获得检测结果，再乘以稀释倍数，即为样品种呕吐毒素浓度。
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