E+ TOP10 感受态细胞说明书

（Rev.A）

保存：-80℃保存，运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存至少一年，-80℃保存至少6个月。

产品简介：

本公司生产的E⁺ TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺制备得到，具有无需繁琐的冰浴、热击程序，简单快速的进行质粒DNA的转化。使用pUC19 质粒检测，转化效率最高可达 2×10⁷cfu/μg，-80℃保存3-5 个月转化效率不发生改变。

基因型: F_mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)φ80lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoRaraD139Δ(ara-leu)7697 galUgalKrpsL (StrR) endA1 nupG

特 点: 一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其φ80 lacZ△M15基因的产物可与 pUC 载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现 β 互补，可用于蓝白斑筛选。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1.     将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100μl感受态细胞为例。

2.     向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的 DNA 的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

3.     室温静置5-10min。

4.     向离心管中加入 900μl 无菌无抗的 SOC（本试剂盒提供） 或 LB 培养基，37℃ 180rpm 振荡培养 30分钟到1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5.     取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培养 12-16小时或过夜培养。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的 DNA 总量较多，可取 100μl左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA 总量较少，可取 200-300μl的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事项：

1.     感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2.     实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3.     转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4.     为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。