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RealPAGE Tricine蛋白预制胶 10-20%(用于多肽电泳)

RealPAGE Tricine蛋白预制胶 10-20%(用于多肽电泳)


● 产品简介:

RealPAGE Tricine蛋白预制胶可以用来检测1-40 kd的多肽大小。包装里含有电泳缓冲液和上样缓冲液,方便使用。蛋白预制胶采用独特配方,不含SDS,可以进行非变性电泳(需要去除电泳缓冲液和上样缓冲液中的SDS和还原剂)。

预制胶玻璃板尺寸10×8.2 cm,凝胶尺寸8.3×7.5 cm,凝胶厚度1.1 mm,梳子12齿,最大上样体积30 μl,兼容伯乐电泳槽。

该产品配套胶板和缓冲液可以进行10板电泳。

运输和贮存:

本产品常温运输;4-8℃贮存,不能冷冻;有效期3个月。

● 使用说明:

安装凝胶:

拆开预制胶包装,将预制胶安装在合适的电泳槽中。

电泳缓冲液配制:

10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制:

10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)粉末(CatCB010P)置于一干净的一升烧杯中,加入500ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500ml 10×TTS缓冲液。用前按照下表稀释10倍配成1×TTS缓冲液。


1×TTS配制量 500 ml

10×TTS

50 ml

超纯水

450 ml

注:伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500 ml 1×TTS缓冲液。

样品处理:

      待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液[CatTP050]等体积混合,75℃处理5-10分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液,根据说明书上样(预染Marker不能加热处理,非预染Marker上样前一般要75℃处理5-10分钟)。

电泳:

4.1 将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液,轻柔拔出梳子,用1ml移液器将梳孔吹洗干净,将Marker或蛋白样品(已经过处理)加入点样孔,稳压电泳(表二),至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

表二 多肽电泳条件

恒电压

150V

起始电流

60-75mA/板胶

结束电流

15-25mA/板胶

电泳时间

2.5-3小时

4.2 拆胶:

      电泳结束后,取出凝胶,用刀片沿着短玻璃板和边条的缝隙划开两侧粘合胶,即可打开玻璃板。取胶时,需在凝胶和玻璃边条之间,沿着玻璃边条轻划一刀,防止发生粘连使凝胶破碎。

 

试剂盒/抗体/蛋白

四.染色:(使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202)

4.1 用前必读:

4.1.1 使用前如发现瓶中有少许沉淀,请混匀后使用。

4.1.2以下“使用方法”是针对0.75mm和1.0 mm厚度,10×10cm凝胶染色程序。

4.2 使用方法:

4.2.1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适),条带1-2分钟即可见。

4.2.2. 摇床上常温摇动10-15分钟。

4.2.3. 观察结果。

4.4注意事项:

4.4.1 使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝胶,如果使用更大面积或更厚的凝胶,请加入更多的染色液并延长染色的时间。

4.4.2 常规染色所需的漂洗,固定,脱色步骤都无必要。

4.4.3 本染色液可以重复利用1-2次,敏感性会有轻微下降,请延长染色时间。

4.4.4 本染色液有轻微腐蚀性,请带手套操作。使用后,请盖好瓶盖,常温密封保存。

五. 转膜:

多肽转膜选择孔径0.22 μm PVDF膜(用前用甲醇处理润湿)或0.22 μm NC膜。

5.1 半干转:

半干转转膜缓冲液:

48 mM Tris,39 mM Glycine,0.0375 %SDS,20% Methanol,pH~9.2

转膜条件:恒流200 mA 15-20 min。

5.2 湿转:

湿转转膜缓冲液:

25 mM Tris,192 mM Glycine,0.1%SDS,20% Methanol,pH~8.3

转膜条件:恒流400 mA  40-60 min

六. 缓冲液配方:

10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液

[1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3]

Tris碱121.14g

Tricine 179.2g

SDS 10 g

用ddH2O溶解,定容至1000 ml (不要调pH)。

贮存:4℃

注:使用前稀释10倍使用

 

2×Tricine多肽上样缓冲液(10 ml)

1ml 1MTris-HCl pH6.8

2.4 ml 甘油

0.8 g  SDS

0.31gDTT(或者400 μl β-巯基乙醇)

2 mg 考马斯亮蓝G-250

用灭菌ddH2O定容至10ml

混匀分装-20℃贮存备用


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产品货号:gl6122-1020

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