● 产品简介：

RealPAGE Tricine蛋白预制胶可以用来检测1-40 kd的多肽大小。包装里含有电泳缓冲液和上样缓冲液，方便使用。蛋白预制胶采用独特配方，不含SDS，可以进行非变性电泳（需要去除电泳缓冲液和上样缓冲液中的SDS和还原剂）。

预制胶玻璃板尺寸10×8.2 cm，凝胶尺寸8.3×7.5 cm，凝胶厚度1.1 mm，梳子12齿，最大上样体积30 μl，兼容伯乐电泳槽。

该产品配套胶板和缓冲液可以进行10板电泳。

● 运输和贮存：

本产品常温运输；4-8℃贮存，不能冷冻；有效期3个月。

● 使用说明：

一. 安装凝胶：

拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。

二. 电泳缓冲液配制：

10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制：

将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液（10×TTS）粉末（Cat：CB010P）置于一干净的一升烧杯中，加入500ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500ml 10×TTS缓冲液。用前按照下表稀释10倍配成1×TTS缓冲液。

注：伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500 ml 1×TTS缓冲液。

三. 样品处理：

      待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液[Cat：TP050]等体积混合，75℃处理5-10分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液，根据说明书上样（预染Marker不能加热处理，非预染Marker上样前一般要75℃处理5-10分钟）。

四. 电泳：

4.1 将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品（已经过处理）加入点样孔，稳压电泳（表二），至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

表二 多肽电泳条件

4.2 拆胶：

      电泳结束后，取出凝胶，用刀片沿着短玻璃板和边条的缝隙划开两侧粘合胶，即可打开玻璃板。取胶时，需在凝胶和玻璃边条之间，沿着玻璃边条轻划一刀，防止发生粘连使凝胶破碎。

四.染色：（使用FastBlue蛋白染色液 Cat：RTD6202）

4.1 用前必读：

4.1.1 使用前如发现瓶中有少许沉淀，请混匀后使用。

4.1.2以下“使用方法”是针对0.75mm和1.0 mm厚度，10×10cm凝胶染色程序。

4.2 使用方法：

4.2.1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），条带1-2分钟即可见。

4.2.2. 摇床上常温摇动10-15分钟。

4.2.3. 观察结果。

4.4注意事项：

4.4.1 使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝胶，如果使用更大面积或更厚的凝胶，请加入更多的染色液并延长染色的时间。

4.4.2 常规染色所需的漂洗，固定，脱色步骤都无必要。

4.4.3 本染色液可以重复利用1-2次，敏感性会有轻微下降，请延长染色时间。

4.4.4 本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。使用后，请盖好瓶盖，常温密封保存。

五. 转膜：

多肽转膜选择孔径0.22 μm PVDF膜（用前用甲醇处理润湿）或0.22 μm NC膜。

5.1 半干转：

半干转转膜缓冲液：

48 mM Tris,39 mM Glycine,0.0375 %SDS，20% Methanol,pH~9.2

转膜条件：恒流200 mA 15-20 min。

5.2 湿转：

湿转转膜缓冲液：

25 mM Tris,192 mM Glycine,0.1%SDS，20% Methanol,pH~8.3

转膜条件：恒流400 mA  40-60 min

六. 缓冲液配方：

10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液

[1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3]

Tris碱121.14g

Tricine 179.2g

SDS 10 g

用ddH₂O溶解，定容至1000 ml (不要调pH)。

贮存：4℃

注：使用前稀释10倍使用

2×Tricine多肽上样缓冲液（10 ml）

1ml 1MTris-HCl pH6.8

2.4 ml 甘油

0.8 g  SDS

0.31gDTT（或者400 μl β-巯基乙醇）

2 mg 考马斯亮蓝G-250

用灭菌ddH₂O定容至10ml

混匀分装-20℃贮存备用