● 产品简介：

Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一种从生物样品（质膜，胞浆等）中分离分子量10 kD-10000 kD 范围的蛋白质复合物的电泳技术。其原理是用温和去污剂(如 DDM，digitonin)将蛋白复合体从细胞膜中以近似天然的状态分离出来，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考马斯亮蓝 G-250 代替 SDS与蛋白结合而使其带负电荷，根据蛋白分子量不同在 PAGE胶中得到分离；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是电泳缓冲液中不加入任何染料，电泳中始终保持蛋白的天然电荷和活性状态，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考马斯亮蓝G-250存在，使蛋白都覆盖上负电荷，可以分离碱性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只适合于酸性蛋白（pI＜7）的分离。

本产品可以用于分离分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白复合体，样品可以来于胞浆、细胞总裂解液、细胞膜、线粒体膜和叶绿体膜等。电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交、SDS-PAGE电泳、蛋白纯化、蛋白活性检测等分析实验，也可直接用于电洗脱制备蛋白。

● 运输和贮存：

本产品常温运输；凝胶4-8℃贮存，不要冷冻；有效期6个月。

● 使用说明：

一. 样品制备：

   该试剂盒不含样品制备的相关试剂。

二. 电泳：

2.1 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。

2.2 准备电泳缓冲液：

10×BN/CN电泳缓冲液稀释10倍即配成1×BN/CN电泳缓冲液。

2.2.1 CN-PAGE电泳：

内槽缓冲液（阴极缓冲液）和外槽缓冲液（阳极缓冲液）均直接使用1×BN/CN电泳缓冲液进行电泳。

2.2.2 BN-PAGE电泳：

外槽缓冲液使用1×BN/CN电泳缓冲液，内槽缓冲液按照下表配制：

2.3准备样品：

2.3.1 CN-PAGE电泳：

2.3.2 BN-PAGE电泳：

样品中G250终浓度为去垢剂终浓度的1/4。

例如样品中DDM终浓度为1%，则需要G-250终浓度为0.25%。10 μl蛋白样品中需要加5% G-250染料0.5 μl。

2.4电泳过程；

2.4.1 CN-PAGE电泳：

电泳内外槽均使用1×BN/CN电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×BN/CN电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻拨出预制胶梳子，用1ml吸头冲洗加样孔3次，随后在电泳槽外槽加入适量的1×BN/CN电泳缓冲液，冰浴电泳，。

电泳条件（一板胶）

2.4.2 BN-PAGE电泳：

BN-PAGE电泳外槽使用1×BN/CN电泳缓冲液；内槽开始电泳使用的是1×蓝色阴极缓冲液，冰浴电泳，等待电泳指示前沿到达凝胶1/3处时，将电泳缓冲液更换为1×BN/CN电泳缓冲液，继续后续电泳，因为过多染料会影响蛋白在凝胶中的迁移以及蛋白后续的转膜实验。

BN-PAGE电泳条件（一板胶）

三. 缓冲液配方：

3.1  10×BN/CN电泳缓冲液

终浓度  组份    500 ml

0.15 M  Bis-Tris   15.7 克

0.5 M  Tricine    44.8 克

超纯水 定容至500 ml

彻底溶解，测定pH应为7.0左右，不要调节pH。

3.2  0.4% G-250 染料（电泳用）

    100ml：0.4克考马斯亮蓝G-250，溶于100 ml超纯水中，漩涡搅拌2-3小时，至染料彻底溶解，4℃贮存。

3.3  4×BN/CN 蛋白上样缓冲液

组成：200mM Bis-Tris，40%甘油，200 mM NaCl，0.04%丽春红S  pH7.0

3.4  5% G-250 染料（上样用）

    组成： 5% G-250，500 mM 6-氨基己酸

    50 ml：称取2.5克考马斯亮蓝G-250，3.28克6-氨基己酸溶于50 ml超纯水中，漩涡搅拌2-3小时，至染料彻底溶解，4温度贮存。